射流真空系统在制药行业溶媒回收工艺中的高效应用项目案例

中药复方"加味白头翁"颗粒剂的研制及其对鸡大肠杆菌病的疗效观察

鸡大肠杆菌病(Chicken colibacillosis)是由某些血清型致病性大肠埃希氏菌(Escherichiacoli,简称大肠杆菌E. coli)引起的各种传染性疾病的总称,临床表现呈多种症型,较为常见的包括急性败血症,气囊炎,肝周炎,心包炎,卵黄炎性腹膜炎,肠炎,脐炎及肿头综合征等.该病发病率和死亡率均很高,是严重危害养殖业发展的主要细菌疾病,常给养鸡业带来巨大的经济损失.临床常用抗生素,化学抗菌药或疫苗进行治疗,但药物残留严重,耐药性及多种致病性大肠杆菌血清型限制疫苗普遍应用等问题不断凸显.为开发低成本,疗效好,低残留的新型抗鸡大肠杆菌病药物,本研究选择经典方剂"白头翁散"并在中医基础理论的指导下对其进行合理的调整与加味,组方形成"加味白头翁散",并利用现代提取方法,对处方中的有效成分进行了提取.考察指标为中药复方提取物的得率,对临床分离鸡大肠杆菌的体外最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration, MIC),最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration, MBC)及提取物中的主要成份秦皮乙素(aesculrtin)和盐酸小檗碱(berberine hydrochloride)的含量,最终筛选得到"加味白头翁散"有效成分的最佳提取工艺,并将提取得到的中药复方有效成分制备成颗粒制剂,建立该颗粒制剂的质量标准,最后观察该颗粒剂对鸡大肠杆菌病的临床疗效.主要研究结果如下: 1采用单因素试验,以提取溶媒为单因素考察对象,以提取物有效部位提取率,对鸡大肠杆菌临床菌株的MIC值和MBC值,有效部位中秦皮乙素及盐酸小檗碱含量为考察指标,采用冷凝回流提取法,体外平皿稀释法及反向高效液相色谱法初筛适宜的溶媒.结果显示,溶媒乙醇浓度在30%,50%,60%,70%和95%时,有效部位提取率分别为20.93%,23.02%,22.08%,22.44%和18.34%;对大肠杆菌MIC值分别为3.270mg·mL-1,3.597mg·mL-1,3.450mg·mL-1,3.506mg·mL1-和5.731mg·mL-1; MBC值分别为13.080mg·mL-1,7.194mg·mL-1,6.900mg·mL-1,7.012mg·mL-1和5.731mg·mL-1;秦皮乙素含量分别为0.04%,0.08%,0.10%,0.11%和0.07%;盐酸小檗碱含量分别为0.19%,0.45%,0.37%,0.55%和0.38%.结果表明,以浓度为50%,60%,70%的乙醇为提取溶媒时各对应考察指标值均明显优于以浓度为30%和95%乙醇为提取溶媒的试验组,因此初选浓度50%,60%,70%的乙醇用于下一步正交试验筛选最佳提取工艺. 2采用L9(34)正交试验,以料液比(A),提取次数(B),提取时间/次(C)及乙醇浓度(D)为考察因素,以提取物有效部位浸膏得率,对鸡大肠杆菌临床菌株的MIC和MBC,浸膏中秦皮乙素含量及盐酸小檗碱含量为考察指标,采用冷凝回流提取法,体外平皿稀释法及高效液相色谱法筛选最佳提取工艺.经过正交试验分析及方差分析最终确定最佳提取工艺组合为A3B3C1D2即料液比为1:10,提取次数为3次,0.5小时/次,60%乙醇浓度.在该工艺条件下,复方有效部位浸膏得率为24%;对临床分离鸡大肠杆菌的MIC和MBC值均为3.750mg·ml-1;秦皮乙素及盐酸小檗碱的含量分别为0.13%和0.57%. 3优选"加味白头翁"颗粒剂的辅料组成,考察其各方面性质.首先按照实验室颗粒剂制剂方法,筛选适宜的药液(提取后溶液浓缩到2g生药·mL-1浓度)与辅料总量比例,主要以软材品质和颗粒外观作为指标.结果表明,当药液与辅料比例为1:5时,软材品质及颗粒外观均合符标准.正交试验优选辅料组份,选择常用的可溶性淀粉,α-乳糖及糊精用量及作为黏合剂的羧甲基纤维素钠(HPMC)溶液的不同浓度为因素,以外观,澄明度,含水量为考察指标,确定各辅料的最佳组合.结果表明,"加味白头翁"颗粒剂的最佳处方为,可溶性淀粉:a-乳糖:糊精为3:1:1,且以0.3%HPMC为黏合剂.在该工艺下制备的颗粒剂外观色泽均匀,少碎末;澄明度良好,微有浑浊;含水量约为2.90%.以上各指标符合中药颗粒剂的质量要求. 4采用岛津SH MADZU LC-2010C HT (CLASS-VP6.13multi)高效液相色谱系统,建立"加味白头翁"颗粒中秦皮乙素及盐酸小檗碱的含量测定方法.将颗粒剂用甲醇溶解,以色谱条件为色谱柱为Krom asil C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为乙腈—0.1%磷酸(12:88,v/v);柱温为25℃;流速为1.1mL·min-1;检测波长为334nm;进样量为10μL.理论塔板数按秦皮乙素峰计算应不低于5000块·m-1测定秦皮乙素含量.结果显示:在21.60μg·mL-1～129.60μg·mL-1范围内呈良好的线性关系(r=0.9997,n=6),加样回收率为98.27%,RSD=1.16%(n=6).以色谱条件为Krom asil C18柱(4.6mm×250mm,5μm),流动相为乙腈与0.03mol·L-1磷酸二氢钾溶液体积比30:70的混合溶液,流速1mL·min-1紫外检测波长:265nm,柱温:30℃,进样量为10μL,测定颗粒中盐酸小檗碱含量.结果显示:在93.00μg·mL-1～186.0μg·mL-1范围内呈良好的线性关系(r=0.9997,n=6),平均回收率为99.49%.RSD=0.76%."加味白头翁"颗粒剂中秦皮乙素及盐酸小檗碱的平均含量分别为0.36mg·g-1和2.90mg·g-1.结果表明,该方法简单,灵敏,准确可靠. 5观察"加味白头翁"颗粒剂对自然感染致病性大肠杆菌鸡的疗效.挑选若干只患病症状基本相同的病鸡,进行临床及实验室病症确诊,确诊后,随机挑选150只病鸡平均分为5组,I组为复方颗粒低剂量组(2%,颗粒质量:饲料质量);Ⅱ组为复方颗粒中剂量组(4%,颗粒质量:饲料质量);Ⅲ组为复方颗粒高剂量组(8%,颗粒质量:饲料质量);Ⅳ组为1%磺胺间甲氧嘧啶西药标准用量对照组;V组为空白组(不投药),每组30只,并进行对应饲喂治疗.投药期7天后,对"加味白头翁"颗粒剂的疗效进行初步的评估.结果显示,空白组无疗效率为76.7%,磺胺组无疗效率43.3%,中药低剂量组无疗效率为56.7%,中药中剂量组无疗效率为40%,中药高剂量组无疗效率为36.7%.空白组死亡鸡与未死亡鸡经临床病征判断,实验室病原菌分离和病理切片表明该组病鸡呈现典型的和严重的大肠杆菌疾病特征;磺胺组和中药组死亡鸡与未死亡鸡经临床病征判断,实验室病原菌分离和病理切片表明患病鸡只经磺胺药物和"加味白头翁"颗粒剂治疗后,疾病得到有效控制.以上结果说明"加味白头翁"颗粒具有效治疗鸡大肠杆菌病的功效,且以4%的添加量最佳.

制药生产过程中含醋酸丁酯废水的蒸馏回收

介绍一种大通量高效塔板--立体传质塔板(CTST),该塔板先后在华北制药集团,河北石家庄制药集团,山东鲁抗医药股份有限公司等十余家企业生产中的废醋酸西酯回收过程中成功应用,能耗降低40%,溶媒收率提高15%以上.

高效液相色谱法测定米非司酮血药浓度的改进

目的:建立简便,有效的血浆样品提取方法,用于米非司酮(RU486)血药浓度的高效液相色谱(HPLC)法测定.方法:以无水乙醇沉淀血浆蛋白,过滤,滤液挥至无乙醇味,碱化后以氯仿为提取液,甲醇为溶媒,在波长302nm处以反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定.结果:米非司酮在0.082μg.ml-1―5.248μg.ml-1,内有良好的线形关系,平均回收率为(100.1±5.93%),RSD日内2.21%,RSD日间3.34%,30例孕妇口服RU486后平均血药浓度为:0.520±0.05μg.ml-1.结论:本方法提取简便,灵敏度高,专属性强,重现性好,适用于临床血药浓度测定及药动学研究.

高效液相色谱法测定米非司酮血药浓度的改进

目的:建立简便、有效的血浆样品提取方法,用于米非司酮(RU486)血药浓度的高效液相色谱(HPLC)法测定.方法:以无水乙醇沉淀血浆蛋白,过滤,滤液挥至无乙醇味,碱化后以氯仿为提取液,甲醇为溶媒,在波长302nm处以反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定.结果:米非司酮在0.082μg.ml-1―5.248μg.ml-1,内有良好的线形关系,平均回收率为(100.1±5.93%),RSD日内2.21%,RSD日间3.34%,30例孕妇口服RU486后平均血药浓度为:0.520±0.05μg.ml-1.结论:本方法提取简便、灵敏度高、专属性强、重现性好,适用于临床血药浓度测定及药动学研究.

一种酶法制备氨苄西林的工艺

一种酶法制备氨苄西林的工艺,其包括以下步骤:(a)将6-氨基青霉烷酸,苯甘氨酸衍生物与青霉素G酰化酶混合于水中,得混合液;(b)用酸或碱调节控制混合液的pH值为5.5～6.1后,在温度为0～40℃下进行反应;(c)待反应完全后,分离,将含有氨苄西林粗品的反应液用酸溶清,再用碱结晶,养晶,洗涤,干燥,得氨苄西林产品.本发明提供的制备工艺不仅工艺简单,操作方便,能耗较小,安全性高,稳定性好,而且反应体系要求的pH值易于控制,反应时间短,转化率高达99%以上,产品纯度高,无需溶媒回收.因此,本发明在工业生产的推广应用中是一种低成本,高效率的生产工艺.

丹参酮ⅡA磺酸钠分离分析和药动学研究

本文以中药有效成分丹参酮ⅡA磺酸钠为研究对象,对其进行了分离分析,稳 定性,新剂型开发,质量全面评价,结构修饰,药效学初步研究,药动学和吸收分布研究.在质量和稳定性研究的基础上开发了注射用丹参酮ⅡA磺酸钠,在有关物 质的分析过程中得到了丹参酮Ⅰ磺酸钠,初步研究表明:与已上市的丹参酮ⅡA磺酸钠比较,丹参酮Ⅰ磺酸钠在理化性质,药效和安全性各个方面都有优势,在初步 实现丹参酮ⅡA磺酸钠二次开发的同时,为开发更为安全有效的新药做了有效的探索性研究,为中药的发展和新药的研究提供了新思路.具体内容如下: 丹参(Radixsalviaemiltiorrhizae)为唇形科植物丹参(salviamiltiorrhizaBge.)以根入药.最早记载于 《神农本草经》,主要用于祛瘀止痛,活血调经,养心除烦等,对冠心病,心血管病常服疗效很好;对慢性肝炎,早期肝硬化等疾病具有良好效果.其主要有效成分 为丹参酮类化合物,而丹参酮ⅡA是其中最主要的有效成分,具有抗菌,抗免疫,抗过敏,抗氧化,抗肿瘤和抗血小板凝聚等多种生物活性,由于丹参酮ⅡA水溶性 差,临床应用受限制,将丹参酮ⅡA磺化成丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)可增加其水溶性.本文围绕丹参主要有效成分进行以下几个方面的研究: 1.丹参酮ⅡA和丹参酮Ⅰ的提取分离,纯化和结构鉴定,从丹参药材提取分离得到丹参酮ⅡA和丹参酮Ⅰ,应用UV,1H-NMR和13C-NMR谱对其结构进行鉴定. 2.丹参酮ⅡA的磺化与丹参酮ⅡA磺酸钠的结构鉴定,对分离得到的丹参酮ⅡA进行磺化,经UV,1H-NMR,13C-NMR,COSY,HSQC和HMBC等方法,确证为丹参酮ⅡA磺酸钠. 3.HPLC法测定注射用丹参酮ⅡA磺酸钠含量及其有关物质,建立了高效液相色谱梯度洗脱法测定丹参酮ⅡA磺酸钠含量及其有关物质(丹参酮Ⅰ磺酸钠和丹参 酮ⅡA)的方法.采用RestekC18(4.6mm×200mm,5μm,)色谱柱,流动相为A相(0.02mol/L磷酸氢二钠缓冲溶液,用磷酸调 pH为7.0)-B相(甲醇)进行梯度洗脱(B相起始比例为50%,10min内上升到70%,保持5min,30minB相占95%),流速为 1mL/min,检测波长为271nm.该法能使被测定峰与其他峰达到基线分离,丹参酮ⅡA磺酸钠,丹参酮Ⅰ磺酸钠及丹参酮ⅡA的线性范围分别为 19.98～119.88μg/mL(r=0.9999),0.202～1.212μg/mL(r=0.9999)及0.202～1.212μg /mL(r=0.9998);平均回收率分别为99.8%,99.6%,99.7%,RSD分别为2.2%,2.0%,2.3%(n=9). 4.丹参酮ⅡA磺酸钠中杂质的分离分析,首先通过LC-MS法对丹参酮ⅡA磺酸钠中的杂质进行初步分析,它们分别初步推测可能为丹参酮ⅡB磺酸钠,丹参酸 甲酯磺酸钠,丹参酮Ⅰ磺酸钠,丹参酸磺酸钠,1,2-去氢丹参酮ⅡA磺酸钠和紫丹参甲素磺酸钠.之后对丹参酮ⅡA磺酸钠杂质进行制备分离与结构鉴定,将丹 参酮ⅡA磺酸钠合成粗品用甲醇重结晶,取其母液,浓缩,经硅胶柱洗脱分段,初步分离后,再采用制备高效液相色谱法分离制备了丹参酮ⅡA磺酸钠中的杂质,得 到ImpurityA,ImpurityB和ImpurityC;经UV,MS,1H-NMR,13C-NMR,COSY,HSQC和HMBC等方法对杂 质进行结构鉴定,证明ImpurityA为丹参酸甲酯磺酸钠,而ImpurityB是混合物,推测其可能为1,2-去氢丹参酮ⅡA磺酸钠和紫丹参甲素磺酸 钠的混合物;ImpurityC为丹参酮Ⅰ磺酸钠.最后对分离得到的丹参酮Ⅰ进行磺化,比较ImpurityC与合成的丹参酮Ⅰ磺酸钠的熔点,UV扫描图 谱和高效液相色谱行为,两者均一致,从而进一步证实了ImpurityC为丹参酮Ⅰ磺酸钠. 5.丹参酮ⅡA磺酸钠的稳定性研究,文献报道丹参酮ⅡA不稳定,本论文分别考察了光照,温度,氧化剂,酸,碱及金属离子对丹参酮ⅡA磺酸钠的稳定性影响. 光照对丹参酮ⅡA磺酸钠影响显著,其中日光对丹参酮ⅡA磺酸钠破坏最强,日光照射8h后可使其降解为原来的8%;灯光降解作用类似于日光,但较缓和一些; 紫外光使丹参酮ⅡA磺酸钠的峰面积增加,同时也增加其它杂质峰的峰面积.溶媒对丹参酮ⅡA磺酸钠的影响也比较大,丹参酮ⅡA磺酸钠的60%甲醇溶液降解产 物比较多,而以流动相为溶媒时,主要降解产物为X1;以纯甲醇为溶媒时,主要降解产物为ImpurityA,即丹参酸甲酯磺酸钠;以水为溶媒时,主要降解 产物为X3.浓度对样品的稳定性也有一定影响,浓度越高降解程度越低,越稳定.而氧化剂,酸,碱及金属离子对丹参酮ⅡA磺酸钠在24h内均没有明显破坏作 用;水浴加热对丹参酮ⅡA磺酸钠含量变化也无显著影响. 6,基于丹参酮ⅡA磺酸钠遇光不稳定,在溶液状态下不稳定和高温灭菌不稳定的性质,开发了注射用丹参酮ⅡA磺酸钠冻干制剂,确定了处方,建立了工艺,对本品进行了初步的质量评价,使得丹参酮ⅡA磺酸钠制剂的质量标准和用药的安全性有了整体的提升. 7,对丹参酮Ⅰ磺酸钠进行初步药效学研究,并与丹参酮ⅡA磺酸钠的药理毒理性质比较发现丹参酮Ⅰ磺酸钠在药理毒理方面的性质要优于丹参酮ⅡA磺酸钠. 8,用HPLC-MS/MS法对丹参酮ⅡA磺酸钠进行了药代动力学研究.建立了大鼠血浆及组织生物样品中丹参酮ⅡA磺酸钠的HPLC-MS/MS测定方 法.以丹参酮Ⅰ磺酸钠为内标,采用乙腈沉淀蛋白法进行提取,HPLC-MS/MS分离,分析.色谱系 统:PhenomenexLunaC18(2.0mm×150mm,5μm)色谱柱,甲醇:5mmol/L醋酸铵溶液(70:30)为流动相,流速 0.20mL/min,柱温30℃.按13.5mg/kg剂量静脉给药,丹参酮ⅡA磺酸钠在大鼠体内的处置过程符合三房室模型,其主要要动学参数为:t1 /2α(0.08±0.03)h,t1/2β(0.82±0.17)h,t1/2γ(3.26±1.02)h,CL为(1.59±0.03)L/h /kg,给药后,药物能分布到大部分组织,主要分布在肝,肾,生殖器及胃肠组织.本品分布广泛,除心,脑,脂肪,肌肉中浓度较低外,大部分组织在静脉注射 后药物均能迅速分布到,药物在各组织中持续时间不长,产生蓄积的可能性不大.